將待測DNA片段轉(zhuǎn)變成一系列放射性核素標記的單鏈寡核苷酸，并使其一端為一固定的末端。另一端由于長度不同，成為一系列相差一個堿基的連續(xù)末端。在分別含有4種脫氧核酸的反應(yīng)體系中，寡核苷酸分別終止于不同位置的A、T、G或C堿基。將4種反應(yīng)體系的寡核苷酸產(chǎn)物，在變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中上樣于相鄰的加樣孔進行電泳分離。由于全部可能產(chǎn)生的不同大小寡聚核苷酸都存在于4種反應(yīng)產(chǎn)物中，從放射自顯影后的4種末端寡聚核苷酸梯子形圖譜中，就可以直接讀出DNA序列。
DNA測序技術(shù)使直接檢測核苷酸突變成為可能，而不僅僅是基因片段的多態(tài)性分析，使臨床基因診斷更加精確。常用于探針設(shè)計、特異引物合成、基因結(jié)構(gòu)分析等，在遺傳病診斷、微生物種屬鑒定、腫瘤診斷等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，人類基因組計劃就是由于大規(guī)模自動化測序技術(shù)的發(fā)展而順利完成的。但由于DNA測序方法復(fù)雜，一般臨床實驗室無法進行，有必要時可委托有條件的公司或研究機構(gòu)進行。
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